RPA（恒溫擴(kuò)增）技術(shù)應(yīng)用于腫瘤基因檢測
腫瘤基因相關(guān)基因檢測在癌癥早期診斷中意義重大。目前的檢測金標(biāo)準(zhǔn)為PCR和基因測序技術(shù)，而這些技術(shù)大多需要精密的儀器和復(fù)雜的試驗流程，專業(yè)的實驗人員配置。在現(xiàn)有的分子診斷技術(shù)中，以RPA為代表的核酸等溫擴(kuò)增技術(shù)以其快速，靈敏，無需儀器等特點(diǎn)，使突破以上壁壘成為可能。
近日，大連醫(yī)科大學(xué)劉元斌課題組發(fā)明一種無需任何儀器，實現(xiàn)快速檢測突變基因并肉眼識別的新方法，被稱為AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。該方法以RPA（重組酶聚合酶恒溫擴(kuò)增技術(shù)）為基礎(chǔ)，加之PNA技術(shù)（肽核酸類似物），并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼即可判斷核酸擴(kuò)增與否。
文章中，作者比較了在PCR，測序以及ARSP在非小細(xì)胞肺癌中EGFR突變檢測應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中，5分鐘便能檢測到EGFR 19Del(2)缺失突變，10分鐘檢測EGFRL SNP 突變，實現(xiàn)肉眼快速判斷（圖1），并在組織樣本中同樣得到驗證（圖2）。
同樣，10到20分鐘之內(nèi)成功檢測到EGFR點(diǎn)突變。與傳統(tǒng)的DNA測序方法相比較，ARPS有著許多優(yōu)勢之處，包括時間短，成本低，操作簡單，無需精密儀器等，而且，在基因組DNA樣本中，ARPS可以檢測到30%和40%的靶向突變位點(diǎn)，靈敏度與測序相當(dāng)（圖3）。之前有文章報道稱，RPA技術(shù)與末端熒光檢測和膠體金側(cè)流試紙條以及微流控芯片結(jié)合檢測EGFR突變，但還沒有類似ARSP肉眼觀測法的應(yīng)用。
然而，ARSP法同樣有待于進(jìn)一步優(yōu)化。比如，對于每一次EGFR檢測來說，檢測靈敏性和特異性都還有待提高；由于樣本量有限，現(xiàn)仍需更多的臨床樣本實驗進(jìn)行驗證。無論如何，在精準(zhǔn)醫(yī)療大背景下，對于一些沒有條件購買測序儀，以及不具備專業(yè)操作能力的不發(fā)達(dá)地區(qū)和國家，這種快速簡便，操作簡單的，無需任何儀器的ARSP基因檢測法無疑為癌癥基因檢測提供有效參考，同時也為分子即時診斷領(lǐng)域（POCT）提供新的潛在解決方案。
文章鏈接：http://www.mdpi.com/1422-0067/17/5/792
國產(chǎn)化RPA試劑盒正在異軍突起，南京沃博生物科技有限公司作為安普未來生物科技有限公司江蘇省獨(dú)家代理。安普未來開發(fā)的核酸恒溫擴(kuò)增技術(shù)稱為重組酶聚合酶擴(kuò)增 (MIPA) 技術(shù)全系列可替代英國TwistDx Inc公司的RPA試劑盒TwistAmp Basic ，TwistAmp exo ，TwistA m p nfo，TwistAmp exo RT，TwistAmp Basic RT，Milenia Hybridtech 1 側(cè)向流試劑條。
運(yùn)用安普未來開發(fā)的核酸恒溫擴(kuò)增試劑盒RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型）并利用SYBR Green I核酸染料法顯色，肉眼就可以看出有無擴(kuò)增。
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