替代PCR，RPA成為致病菌檢測的得力工具
在今年發(fā)表的一系列文章中，RPA技術(shù)被廣泛用于結(jié)核桿菌、耐藥菌MRSA、沙門氏菌等常見致病菌的檢測。在臨床診斷和食品安全方面，為人們提供了簡單快速的實地篩查方案。
RPA在臨床診斷領(lǐng)域的應(yīng)用
艱難梭狀芽孢桿菌（C.difficile）是一種會引起感染性腹瀉的重要致病菌。日前，研究人員以這種致病菌的毒力基因tcdB為靶標，開發(fā)了一個低成本的微流體RPA平臺，文章發(fā)表在十月二十三日的《Analyst》雜志上。這個檢測C.difficile的RPA分析芯片只需要6.4μL的初始樣本，能夠?qū)U增反應(yīng)進行實時監(jiān)控。
據(jù)估計，世界上約三分之一的人體內(nèi)潛伏著結(jié)核病（TB）的致病菌，這些致病菌大多在肺部處于休眠狀態(tài)。改善檢測方法幫助TB診斷，被WHO列為公共建康的首要問題之一。RPA作為一種常溫的快速DNA 擴增法，為資源匱乏的地區(qū)提供了檢測TB的簡便工具。研究人員在RPA的基礎(chǔ)上，快速檢測了結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MTC的DNA（IS6110和IS1081）。在39°C的環(huán)境下，RPA檢測能在20分鐘內(nèi)得出高靈敏度的結(jié)果。進一步研究表明，在檢測TB感染者的肺部樣本時，RPA檢測比熒光顯微鏡檢測還要準確。
抗生素濫用現(xiàn)象使耐藥菌日漸增多，目前這已經(jīng)成為了一個全球性的公共健康問題。作為一種重要且危險的致病菌，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA一直是臨床治療中的棘手問題。在對MRSA進行DNA檢測的時候，引物只能靶標一個多變的染色體區(qū)域，SCCmec。今年七月的《Plos one》雜志上發(fā)表的一項研究，通過多重RPA反應(yīng)篩查了726個MRSA分離物。研究人員通過二代測序發(fā)現(xiàn)，24個RPA未檢出的分離物中出現(xiàn)了新的插入突變，需要重新設(shè)計擴增引物。這一結(jié)果說明，臨床上的MRSA篩查不能完全依賴DNA檢測。
《Microchimica Acta》雜志今年二月的一項研究，展示了能夠同時擴增和檢測三種病原體的RPA芯片，包括淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae）、沙門氏菌（Salmonella enterica）和MRSA。這種芯片可以在二十分鐘以內(nèi)完成三種病原體和對照質(zhì)粒的檢測，S.enterica和MRSA的檢出限可達10CFU，N.gonorrhoeae的檢出限可達100CFU。這項研究中的RPA芯片，有望成為實地篩查重要致病菌的簡便工具。
RPA在食品安全領(lǐng)域的應(yīng)用
產(chǎn)志賀毒素的大腸埃希菌STEC是世界范圍內(nèi)最嚴重的一種食源性致病菌?！禙OODBORNE PATHOGENS AND DISEASE》雜志今年七月發(fā)表的一項研究，在RPA的基礎(chǔ)上首次建立了等溫實時的STEC檢測體系。研究人員設(shè)計并評估了一系列引物和熒光探針，實現(xiàn)了很高的特異性和靈敏度。
沙門氏菌是一種主要的食源性致病菌?！禔nalytical Chemistry》雜志今年三月份發(fā)表的一項研究，將TwistFlow?沙門氏檢測整合到微流體裝置中，構(gòu)建了檢測沙門氏菌DNA的一體化分析系統(tǒng)。這一微流體裝置整合了致病菌檢測的三個主要步驟（DNA提取、RPA擴增和結(jié)果檢測），能夠在三十分鐘內(nèi)以全自動的方式完成檢測。人們可以直接通過側(cè)流層析試紙條看到沙門氏菌檢測的結(jié)果。研究顯示，這種裝置。對PBS和牛奶的檢測下限分別為10CFU/ml和100CFU/ml。
PCR-ELISA已經(jīng)是一個用途相當廣泛的成熟技術(shù)?！禔nalytica Chimica Acta》雜志今年二月發(fā)表的一項研究，首次用RPA取代了PCR，將快速的常溫擴增、生物素/鏈霉親和素體系、和比色法免疫分析結(jié)合起來。這種RPA-ELISA分析法可以用來篩查食品中的安全隱患，比如過敏原（榛子、花生、大豆、蕃茄和玉米）、轉(zhuǎn)基因成分（P35S和TNOS）、致病菌（Salmonella sp.和Cronobacter sp.）以及真菌（Fusarium sp.）。這項研究顯示，RPA-ELISA在上述應(yīng)用中均得到了令人滿意的結(jié)果，有著很高的靈敏度和可重復(fù)性。
文章來源：http://www.biodiscover.com/news/research/115723.html
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