當(dāng)前位置： 首頁 - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒
糜蛋白酶檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0594 | 售價(jià)（元） | 1440 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
|
SH0594 |
糜蛋白酶（Chymotrypsin）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測(cè)定意義：
糜蛋白酶，又稱胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一種蛋白水解酶，能迅速分解變性蛋白質(zhì)。糜蛋白酶的功能與胰蛋白酶相似，但是具有分解能力強(qiáng)、毒性低和不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)。臨床上糜蛋白酶用于痰液稀化，對(duì)膿性和非膿性痰液均有效；也用于創(chuàng)傷或手術(shù)后傷口愈合，如白內(nèi)障摘除。
測(cè)定原理：
糜蛋白酶催化ATEE水解，產(chǎn)物在237 nm有特征光吸收；通過測(cè)定237 nm 光吸收增加速率，來計(jì)算糜蛋白酶活性。
組成：
|
產(chǎn)品名稱 |
SH0594-100T/96S |
Storage |
|
試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
|
試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃避光 |
|
說明書 |
一份 |
|
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入20 ml蒸餾水充分溶解。
自備儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到237 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中保溫30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μl試劑一，200μl試劑二，混勻于237nm測(cè)定4min內(nèi)吸光值變化，記為△A空白管。（從吸光值穩(wěn)定增加開始計(jì)時(shí)）
4. 測(cè)定管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μl粗酶液，200μl試劑二，混勻于237nm測(cè)定4min內(nèi)吸光值變化，記為△A測(cè)定管。（從吸光值穩(wěn)定增加開始計(jì)時(shí)）
注意：空白管只需要測(cè)定一次。
糜蛋白酶活性計(jì)算公式：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃每毫克蛋白每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A測(cè)定管－△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A測(cè)定管－△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃每克樣品每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位。
糜蛋白酶（U/g 鮮重）=(△A測(cè)定管－△A空白管) ×V反總÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A測(cè)定管－△A空白管)÷W
W：樣品質(zhì)量（g）；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10-2 ml；V2：粗酶液總體積（ml），1 ml；V反總：反應(yīng)總體積，220μl=0.22ml； T：反應(yīng)時(shí)間（min），4min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃每毫克蛋白每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A測(cè)定管－△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A測(cè)定管－△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃每克樣品每分鐘催化吸光值增加1為一個(gè)酶活單位。
糜蛋白酶（U/g 鮮重）=(△A測(cè)定管－△A空白管) ×V反總÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A測(cè)定管－△A空白管)÷W
W：樣品質(zhì)量（g）；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10-2 ml；V2：粗酶液總體積（ml），1 ml；V反總：反應(yīng)總體積，220μl=0.22ml； T：反應(yīng)時(shí)間（min），4min。
注意事項(xiàng)：
臨用前配制的試劑配置好后3天內(nèi)使用完畢。