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肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶（CPT-1）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0489 | 售價(jià)（元） | 3600 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0489 |
肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶（CPT-1）檢測(cè)試劑盒（微量法100T/96S） |
100管/96樣 |
測(cè)定意義：
肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶是存在于線粒體內(nèi)膜的一類?；D(zhuǎn)移酶。可逆地催化從?；o酶A將酰基轉(zhuǎn)移至L-肉毒堿的反應(yīng)，在轉(zhuǎn)運(yùn)脂肪酸通過(guò)線粒體內(nèi)膜的過(guò)程中起重要作用。
測(cè)定原理：
基于肉堿和脂酰輔酶A在丙二酰輔酶A存在與否的條件下，通過(guò)肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CPT-I)的作用，產(chǎn)生脂酰肉堿，并釋放出巰基輔酶A(COA-SH)，與Ellman試劑DN-TB反應(yīng)后，產(chǎn)生黃色的TNB。通過(guò)其吸收峰值得變化（412nm），來(lái)定量分析CPT-1的活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0489-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
20ml |
-20℃ |
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試劑三：液體 |
1.5ml |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
30ml |
4℃ |
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試劑五：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑六：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
① 稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1ml試劑一和10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿液于600g，4℃離心5min。
③ 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④ 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CPT-1（此步可選做）。
⑤ 在步驟④的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體CPT-1測(cè)定。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定
（1）在試劑五中加入1ml無(wú)水乙醇，混勻，再加入22ml試劑四，混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
（2）在試劑六中加入1ml蒸餾水，混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、220μl試劑五和10μl試劑六，混勻，記錄412nm處20秒時(shí)的初始吸光度A1和2分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
CPT-1活性計(jì)算：
a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
CPT-1（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=880×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
CPT-1（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T=177.8×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
CPT-1（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.3556×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.4×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
b. 使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
CPT-1（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1760×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
CPT-1（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=355.6×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
CPT-1（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.711×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.4×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。