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測(cè)定意義：

FDA水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。

測(cè)定原理：

FDA是一種無(wú)色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在490nm處有強(qiáng)吸收峰，通過(guò)檢測(cè)490nm處的吸光值變化可計(jì)算得FDA水解酶活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑1瓶，-20℃避光保存，臨用前加4ml試劑三溶解。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋

樣本處理：

稱取風(fēng)干過(guò)30-50目篩土壤約0.1g，備用。

測(cè)定操作表：

充分混勻，30℃，震蕩1h

10000g，25℃，離心5min，取200μl上清于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定490nm處吸光值A，△A1=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，△A2=A測(cè)定管-A對(duì)照管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

酶活性計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

FDA活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品）×V反總÷W

                    = 0.96×（△A2÷△A1）÷W

b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

FDA活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品）×V反總÷W

                    = 0.96×（△A2÷△A1）÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度100μmol/L；V反總：反應(yīng)總體積，0.4ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng):

1、盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。

2、測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。