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堿性木聚糖酶（BAX）測定試劑盒(分光光度法50T/24S)
| 貨號 | SH0208 | 售價（元） | 456 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0208 |
堿性木聚糖酶（BAX）測定試劑盒(分光光度法50T/24S) |
50管/24樣 |
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，BAX一般分離自最適生長pH為9 -11的微生物。
測定原理：
BAX在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計算BAX活力。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0208-50T/24S |
Storage |
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緩沖液：液體 |
65ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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試劑二：液體 |
15ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：液體10ml×1瓶，4℃避光保存。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀，可60℃加熱溶解后使用）。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見分光光度計、1 ml玻璃比色皿和蒸餾水。
粗酶提?。?/span>
1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000g，4℃，離心15min，取上清，作為待測樣品。
2. 酶干粉：稱約0.1mg，加1ml緩沖液溶解待測。
3. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml緩沖液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清待測。
測定操作表：
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對照管 |
測定管 |
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樣品（μl） |
200 |
200 |
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緩沖液（μl） |
300 |
300 |
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試劑一（μl） |
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200 |
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試劑二（μl） |
300 |
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混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應(yīng)30min，立即沸水浴10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水，改變了反應(yīng)體系) |
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試劑一（μl） |
200 |
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試劑二（μl） |
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300 |
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混勻，沸水浴顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系)，1ml玻璃比色皿，540nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。 |
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BAX計算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.8432x - 0.0293，R2 = 0.9985
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力（nmol/min/ml）= （ΔA+0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106
= 391× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應(yīng)時間，30min；稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=1000μL÷200μL=5；
106：轉(zhuǎn)化因子，即1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~0.8之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變；也可以延長或者縮短反應(yīng)時間。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質(zhì)期3個月，建議盡快使用。