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產(chǎn)品描述

      miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by tailing A)是miRNA cDNA第一鏈合成的專用試劑盒(加尾法)。只需一步操作，即可完成加尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。適用于miRNA或總RNA模板，在Poly A Polymerase (PAP)的作用下，在模板3'-末端加Poly (A)，隨后進(jìn)行加尾法逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
本試劑盒中包含專為miRNA加尾法逆轉(zhuǎn)錄定向改造的ToLoScript III RTase和PAP，配以優(yōu)化的緩沖體系，在具有高靈敏度的同時(shí)，最大限度降低pre-miRNA的逆轉(zhuǎn)錄，保證后續(xù)結(jié)果的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。此外，本試劑盒中已提供了后續(xù)cDNA定量需要的qPCR反向引物，方便后續(xù)的實(shí)驗(yàn)流程。推薦使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal，#22204）進(jìn)行cDNA產(chǎn)物后續(xù)定量。

產(chǎn)品優(yōu)勢

? 便捷的實(shí)驗(yàn)操作：只需一步操作，即可完成加尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
? 優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)錄性能：含有專為miRNA加尾法逆轉(zhuǎn)錄定向改造的ToLoScript III RTase和PAP，配以優(yōu)化的緩沖體系。
? 較高的逆轉(zhuǎn)錄特異性：專用的酶與最適的緩沖體系結(jié)合，從而能夠最大限度降低pre-miRNA的逆轉(zhuǎn)錄，保證后續(xù)結(jié)果的特異性和可重復(fù)性。
? 適用范圍較廣：不僅適用于miRNA而且也適用于總RNA模板。

 實(shí)驗(yàn)案例

        1.以293T miRNA為模板(30ng/μl)，使用ToloBio#22113以及其他品牌相關(guān)產(chǎn)品，按照各自說明書推薦程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將得到的cDNA分別在六種引物體系（H10/11/15/16/17/19）中進(jìn)行qPCR定量分析。結(jié)果顯示，ToloBio #22113在不同引物體系中，逆轉(zhuǎn)錄效率優(yōu)于同類產(chǎn)品。

        2.以293T miRNA濃度梯度稀釋為模板，使用ToloBio#22113以及其他品牌相關(guān)產(chǎn)品，按照各自說明書推薦程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到的cDNA進(jìn)行qPCR定量分析，可以看到，使用Tolobio #22113逆轉(zhuǎn)錄miRNA后qPCR檢測得到的溶解曲線單峰且峰形優(yōu)異，特異性更高，且定量效果較好.2.以293T miRNA濃度梯度稀釋為模板，使用ToloBio#22113以及其他品牌相關(guān)產(chǎn)品，按照各自說明書推薦程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到的cDNA進(jìn)行qPCR定量分析，可以看到，使用Tolobio #22113逆轉(zhuǎn)錄miRNA后qPCR檢測得到的溶解曲線單峰且峰形優(yōu)異，特異性更高，且定量效果較好.

實(shí)驗(yàn)流程

1.在RNase-free離心管中配制如下反應(yīng)體系

 用移液器吹打混勻后短暫離心。

2.按下列反應(yīng)程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接進(jìn)行下游qPCR檢測。為避免逆轉(zhuǎn)錄體系對(duì)qPCR反應(yīng)的抑制，可將產(chǎn)物稀釋10~1000倍后使用。若短期內(nèi)不進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)，可-20℃保存。若需長期保存，建議分裝后保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品組成

a.包含dNTP、加尾法逆轉(zhuǎn)錄引物；
b.包含ToLoScript III RTase、RNase inhibitor；
c.qPCR通用反向引物 (用于后續(xù)cDNA定量分析)

 保存條件

        -20℃保存，≤ 0℃運(yùn)輸；