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HOLMES ssRNA reporter (FAM)
| 貨號 | 31111 | 售價（元） | 1000 |
| 規(guī)格 | 1 OD | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品簡介
HOLMES ssRNA reporter (FAM)是單鏈RNA寡核苷酸探針，5′端標(biāo)記FAM熒光報告基團（Reporter），3′端標(biāo)記熒光淬滅基團(Quencher)。當(dāng)HOLMES ssRNA reporter探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號會被淬滅基團淬滅。而當(dāng)HOLMES ssRNA reporter探針被切斷后，5'端的FAM熒光報告基團和淬滅基團分離，從而發(fā)出可被檢測的熒光信號。常見的Cas13酶在與guide RNA、target RNA組成三元復(fù)合物后，都會被激發(fā)出針對ssRNA的反式剪切活性(或稱為旁路切割活性)，將HOLMES ssRNA reporter探針切碎，并發(fā)出熒光信號。
HOLMES ssRNA reporter (FAM)探針經(jīng)過特別的序列優(yōu)化，對Cas13反式切割活性高度敏感，可作為Cas13家族蛋白反式切割反應(yīng)的報告探針，廣泛用于CRISPR診斷反應(yīng)體系以便對靶標(biāo)核酸進(jìn)行快速檢測。
實驗流程
1.反式剪切實驗體系
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × HOLMES Buffer 1 |
2 μL |
1 × |
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10 μM Cas13 Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM guide RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM Target DNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM HOLMES ssDNA reporter |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free water |
Up to 20 μL |
◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據(jù)不同的實驗?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整，用量較少時可先將各組分稀釋后加入體系；
◆ 建議使用低吸附的離心管、吸頭等耗材；
◆ 反式剪切體系中探針的用量和預(yù)期反應(yīng)到達(dá)平臺期的時間可參考各批號Cas酶transU的具體數(shù)值，詳見本公司提供的COA檢測報告。
實時熒光定量PCR儀檢測熒光信號，每30 sec采集一次熒光信號，反應(yīng)溫度根據(jù)不同的Cas13酶最適溫度進(jìn)行設(shè)定。
產(chǎn)品組分
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組分 |
31111 |
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1 OD |
HOLMES ssDNA reporter (FAM) a
a.HOLMES ssRNA reporter (FAM)總量為1 OD (約為8.45 nmol)，為干粉狀態(tài)。使用前請先短暫離心，然后加入84.5 μL DNase/RNase-Free Water溶解，得到濃度為100 μM的貯存液，在無反復(fù)凍融的條件下可于-80℃避光保存6～12個月。使用前再將貯存液用DNase/RNase-Free Water稀釋成10 μM的工作液，按下表推薦的濃度加入CRISPR剪切反應(yīng)體系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6個月內(nèi)使用。
保存條件
-80℃避光儲存；≦4℃運輸。