當(dāng)前位置： 首頁 - 產(chǎn)品目錄 - Western Blot
TMB One Solution (HRP-based ELISA)單組分 TMB 顯色液
| 貨號(hào) | J2001 | 售價(jià)（元） | 268 |
| 規(guī)格 | 100ml | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息：
|
貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
儲(chǔ)存 |
|
J2001 |
TMB One Solution (HRP-based ELISA)單組分 TMB 顯色液 |
100ml |
2-8℃ |
|
J4001 |
TMB One Solution (HRP-based ELISA)單組分 TMB 顯色液 |
500ml |
2-8℃ |
產(chǎn)品簡介
酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）廣泛用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過氧化物酶（HRP）及其偶聯(lián)物是 ELISA 技術(shù)常用的一種酶，能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）發(fā)生顯色反應(yīng)，從而進(jìn)行定量或定性分析。由于 TMB 比其他顯色底物具更高的靈敏度且無致癌性被廣泛使用，TMB 主要用于 ELISA，免疫斑點(diǎn)雜交或免疫組化等實(shí)驗(yàn)，也有報(bào)道將其用于氯的檢測分析。通常 TMB 顯色試劑由多個(gè)組分構(gòu)成，必須在使用前進(jìn)行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對不便且容易導(dǎo)致檢測結(jié)果不穩(wěn)定。本品采用全新的 TMB 顯色技術(shù)，將所有相關(guān)試劑全部配在一個(gè)溶液，即僅由單一溶液組成，不僅簡化了操作步驟，而且使檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
本品專門為 ELISA 實(shí)驗(yàn)而設(shè)計(jì)。檢測原理在于 HRP 或其他適當(dāng)過氧化物酶能催化生成可溶的藍(lán)色產(chǎn)物，此時(shí)通常可在 370nm 測定吸光度。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液（如 0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）終止后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色，此時(shí)可在 450nm 測定吸光度。由于本品顯色敏感度高，線性濃度范圍較寬，極其適合用于定量 ELISA 分析。
本品用于 ELISA 檢測，每個(gè)樣品通常使用 0.1ml 顯色液，則 100ml 本品約檢測 1000 個(gè)樣品，500ml 本品約檢測 5000 個(gè)樣品。
保存與運(yùn)輸方法
保存：2-8℃避光保存，2 年有效。
運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1） 本品含TMB和H2O2，對人體有刺激性，請注意防護(hù)。
2） 如發(fā)現(xiàn)本品出現(xiàn)渾濁或顏色變?yōu)樗{(lán)色，請停止使用。
3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法（ELISA）
1） 使用之前，取出適量單組份 TMB 顯色液，使其回到室溫再開始使用；
2） 參考 ELISA 檢測試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟，當(dāng)與 HRP 標(biāo)記抗體孵育一段時(shí)間后，用適當(dāng)洗滌液洗滌 3-5 次，每次 3-5min。
3） 洗滌完畢后，去除洗滌液，加入 100μl 單組份 TMB 顯色液。
4） 室溫避光孵育 5-30min 或更長時(shí)間（可長達(dá) 24h），直至顯色到預(yù)期深淺?！咀⒁狻浚航ㄗh根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇最佳試劑用量、顯色時(shí)間和反應(yīng)溫度。
5） 直接在 370nm 測定吸光度。或者加入 100μl 0.5-2M H2SO4 終止反應(yīng)，隨后在 450nm 測定吸光度。
常用問題
1. 背景顯色太深
1）如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，如商業(yè)化封閉液或者和一抗相同來源的血清（10%）進(jìn)行封閉。另一方面，使用經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。
2）可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗?jié)舛?。另外，選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液，或延長洗滌時(shí)間也會(huì)有所幫助。
2. 沒有顯色或顯色太弱
1）適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi)，檢測二抗是否被正常顯色。
2）可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如生物素檢測體系。
3）可以適當(dāng)延長顯色時(shí)間。
4）如果上述改進(jìn)不能獲得預(yù)期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或 ELISA 試劑盒。